一、儀器安裝應(yīng)注意事項
1、安裝本儀器的實驗臺應(yīng)水平、穩(wěn)固，并具有足夠的放置空間；
2、避免在具有腐蝕性氣體、大量灰塵或能產(chǎn)生強磁場的地方安裝儀器，否則將會影響儀器的正常運轉(zhuǎn)并且縮短儀器的使用壽命；
3、由于儀器所用的溶劑是易燃并且有毒的，故安裝儀器的房間應(yīng)保證通風，且具有向外排風的裝置，否測會引起中毒或身體不適，也會引起火災(zāi)；
4、安裝四個以上的三芯電源插座（220V，10A）,必須具有專門的接地線（注意絕不能將電源線的中性線作為接地線），并確保儀器電源的電壓穩(wěn)定在交流（220V ±20V）,否測會導致儀器的不正常運作至損壞儀器；
5、實驗室的室溫盡可能控制在15～30℃范圍內(nèi)，并且波動要??；濕度在45%～80%范圍內(nèi)；由空調(diào)或其它設(shè)備產(chǎn)生的氣流不要直吹儀器上，造成儀器的基線不穩(wěn)；避免光線直射及振動；
6、儀器啟動順序：先開高壓恒流泵和紫外檢測器，待紫外檢測器自檢完畢，回到默認波長254nm后，打開工作站軟件；
7、儀器關(guān)閉順序：關(guān)閉氘燈，沖洗儀器及色譜柱，停泵，退出工作站軟件，關(guān)閉儀器的電源開關(guān)。
8、儀器應(yīng)由專人負責，如果使用人員不固定，請準備《儀器使用登記本》，以明確使用情況，及時處理和保養(yǎng)。
二、使用流動相的注意事項
1、過濾
必須使用HPLC 級或相當于該級別的流動相，并要先經(jīng)0.45μm或0.22μm 薄膜過濾。
2、脫氣
1）氦氣脫氣法：利用液體中氦氣的溶解度比空氣低，連續(xù)吹氦脫氣，效果較好，但成本高。
2）加熱回流法：效果較好，但操作復雜，且有毒性揮發(fā)污染。
3）抽真空脫氣法：易抽走有機相。
4）超聲脫氣法：流動相放在超聲波容器中，用超聲波震蕩15~20分鐘，此法效果較差，但操作簡單。
3、如果管路中使用peek樹脂部件，請不要使用下列流動相：濃硫酸、濃硝酸、二氯乙酸、丙酮、四氫呋喃、二氯甲烷、氯仿和二甲基亞砜。
4、含有緩沖鹽溶液的流動相的清洗方法：
1）先用10：90 的甲醇/水（或者乙腈/水），泵的流速：1ml/min把保存在甲醇（或者乙腈）中的色譜柱沖洗40分鐘以上，使色譜柱充滿10：90 的甲醇/水（或者乙腈/水）。
2）更換含有緩沖鹽溶液的流動相。穩(wěn)定后，做樣品。
3）做完樣品后，用10:90的甲醇/水（或者乙腈/水），泵的流速：1ml/min沖洗色譜柱1小時。
4）再用甲醇（或者乙腈），泵的流速：1ml/min 沖洗系統(tǒng)，并將色譜柱和系統(tǒng)保存在甲醇（或者乙腈）中，清洗時間至少為1小時。
三、流動相的過渡(流動相的反相系統(tǒng)改變?yōu)檎嘞到y(tǒng))
在更換流動相進行分析時，一定要注意前一種使用的流動相和所更換的流動相是不是能夠相溶。如果前一種使用的流動相和所更換的流動相不能夠相溶，那就要要采用一種與這二者都能夠相溶的流動相進行過渡。較為常用的過渡流動相為異丙醇，但實際操作中要看具體情況而定，原則就是采用與這二種需更換的流動相都能夠相溶的流動相。一般清洗的時間為30-40 分鐘，直至系統(tǒng)完全穩(wěn)定。
四、帶柱后清洗裝置的恒流泵所用的清洗液
1、反相系統(tǒng)所用的清洗液是10%異丙醇的水溶液（經(jīng)過濾后的）；
2、正相系統(tǒng)所用的清洗液是純異丙醇試劑（經(jīng)過濾后的）。
（注意：帶柱后清洗裝置的恒流泵，其清洗裝置不能沒有清洗液。如果沒有清洗液將會造成其清洗裝置的密封圈的損毀。）
五、管路連接的注意事項 ：
1、將管子完全插入開口端，直至其與開口端的末端相碰為止。否則將產(chǎn)生死體積，引起峰展寬。
2、為了使柱外效應(yīng)減到最小，獲得理想的分析結(jié)果，盡量使用管徑細的管路作為連接。
3、管路接頭不要擰的過緊，以防損壞螺紋。
六、使用進樣閥的注意事項 :
1、液相進樣針均為平頭，切忌不能使用尖頭進樣針，否則將會損毀進樣閥。
2、LOAD為進樣鎖定位置，INJECT為進樣分析位置，互切換時盡量速度快 ，不得在當中停留，否則會導致系統(tǒng)壓力加大。
3、進樣量需至定量環(huán)的3-5倍以上才能精確定量。
4、兩種不同樣品進樣之間應(yīng)該分別用甲醇清洗LOAD和INJECT位置，以防樣品交叉污染。
高效液相色譜儀（HPLC）的幾個使用問題
1、色譜柱中的流動相會排干嗎？
不少做色譜分離試驗的人遇到過這樣的情形：不慎未及時補充流動相，泵將溶劑瓶中的流動相吸干了，HPLC系統(tǒng)由此而停止工作了。如此情況是否會損壞色譜柱？泵是否已將色譜柱中所有流動相都排干了？色譜柱還能使用嗎？
事實上，如果泵將溶劑瓶中的流動相吸干，并不會造成色譜柱的損壞。即使泵中充滿了空氣，泵也不會將空氣排入色譜柱。因為泵只能輸送液體，而不能輸送空氣。相比之下，另一個更可能發(fā)生的情況是忘記蓋上色譜柱兩端的密封蓋或蓋子太松而使色譜柱變干。同樣，整個色譜柱干涸的情況不太容易發(fā)生，多半可能只是色譜柱兩端的幾個毫米變干了，因揮發(fā)掉所有溶劑使色譜柱變干需要相當長的時間。即使色譜柱真的變干了，也不一定就不可救藥了?？梢試L試用一種完全脫氣的、表面張力低的溶劑（如經(jīng)氦氣脫氣的甲醇）沖洗色譜柱以除去氣體。較低的表面張力有助于浸潤填料表面；已脫氣的溶劑應(yīng)該能夠溶解并去除滯留在填料中的氣體。色譜柱大約需要以1mL/min的流速）一個小時或更多的時間被徹底浸潤，恢復到正常狀態(tài)。
2、使用PEEK（polyetheretherketone）管路和接頭需要注意什么問題？
如果經(jīng)常需要改變流路或更換不同品牌的色譜柱，使用PEEK材料制成的管路和接頭會非常方便。PEEK管路容易連接；PEEK接頭不僅無需工具，手擰即可固定，而且容易調(diào)節(jié)錐箍之外的管路長度，方便與不同品牌或規(guī)格的色譜柱相連接。
使用此類材料的管路需要注意的是：PEEK對鹵代烷烴和四氫呋喃的兼容性不好。雖然未觀察到上述溶劑溶解PEEK材料的明顯跡象，但PEEK遇到上述溶劑會變脆。另一個需要考慮的因素是壓力限。不銹鋼管可耐受6000psi的壓力，但PEEK管只能耐受近4000psi（但多數(shù)HPLC應(yīng)用系統(tǒng)壓力不會超過3000psi）。
使用PEEK接頭時則無需擔心接頭耐溶劑性能，因為接頭幾乎或很少與溶劑直接接觸。但手擰固定的PEEK接頭壓力限低于不銹鋼管，因而壓力太高時，可能會使接頭在管路上滑動而產(chǎn)生死體積或漏液。
3、如何預(yù)防液相泵的故障？
要保持泵的良好操作性能，必須維護系統(tǒng)的清潔，保證溶劑和試劑的質(zhì)量，對流動相進行過濾和脫氣。下面列出預(yù)防泵故障的幾項措施:
1）用高質(zhì)量試劑和HPLC級溶劑
2）過濾流動相和溶劑
3）脫氣
4）每天開始使用時放空排氣，工作結(jié)束后從泵中洗去緩沖液
5）不讓水或腐蝕性溶劑滯留泵中
6）定期更換墊圈
7）需要時加潤滑油
8）查閱有關(guān)泵操作手冊中的其它建議
HPLC系統(tǒng)應(yīng)用秘訣
秘訣1：由強到弱：一般先用90%的乙腈(或甲醇)/水(或緩沖溶液)進行試驗， 這樣可以很快地得到分離結(jié)果，然后根據(jù)出峰情況調(diào)整有機溶劑(乙腈或甲醇)的比例。
秘訣2 ：三倍規(guī)則：每減少10%的有機溶劑(甲醇或乙腈)的量，保留因子約增加3倍，此為三倍規(guī)則。這是一個聰明而又省力的辦法。調(diào)整的過程中，注意觀察各個峰的分離情況。
秘訣3：粗調(diào)轉(zhuǎn)微調(diào)：當分離達到一定程度，應(yīng)將有機溶劑10%的改變量調(diào)整為5%，并據(jù)此規(guī)則逐漸降低調(diào)整率，直至各組分的分離情況不再改變。